分光光度計用途:
分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。該儀器是食品廠、飲用水廠辦理QS、HACCP認證的必備檢驗設備。分光光度法則是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū)(2)400~760nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進行校正檢定。分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,分光光度計基本組成定量以及**生長濃度的定量。分光光度計主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。分光光度計物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區(qū),除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即儀器有一定的準確度和**度。這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動,都是正常的。另外,還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時,離子濃度太高,也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液。
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